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當中藥遇上HPLC — 使用HPLC指紋圖譜鑒別白芍與赤芍

A-A+日期:2019-01-14來源:北京綠綿科技有限公司    

 前言

白芍和赤芍屬于芍藥科芍藥屬,是同一物種的變種。兩者名字中的顏色不是指花的顏色,而是指根的顏色。

在中藥中,白芍和赤芍是許多不同藥劑配方中使用的重要藥材。赤芍在中醫中的主要作用是祛血熱、活血化瘀,它最重要的用途和適應癥是流行性熱癥的麻疹,嘔血,鼻出血,疼痛的紅腫眼睛,腫脹,膿腫和癤子等。而白芍最好用作補血補品,也可用作“減熱”(或“除熱”)肝藥。根據中醫方法學和理論,白芍有助于治療腹痛和肌肉痙攣。另外,中醫也相信它對出汗也有收斂作用,而且在本質上是抗菌、抗痙攣和抗炎的。

QQ截圖20181207160834.png

 

為了確保兩種芍藥品種的鑒別,我們開發了一種HPLC指紋圖譜方法來區別兩個芍藥品種。

 

結果

對芍藥根樣進行了分析,表明赤芍和白芍的植物源提取物是不一樣的。同時也對芍藥配方顆粒提取物進行了測定,并與原植物樣品提取物進行了比較,以說明其與赤芍或白芍之間的關系。此外,赤芍和白芍兩個樣品中主要的活性成分——芍藥苷,能很好地被分析標準所識別。圖1顯示了赤芍和白芍的植物提取物的HPLC圖譜,芍藥苷在13.40min處被檢測到。赤芍的特征組分的保留時間為26min,它在白芍樣品中沒有被檢測到。圖2顯示了赤芍配方顆粒提取物與赤芍植物提取物的HPLC圖譜。有三種組分(保留時間為21.34、22.33、22.63 min)在顆粒物提取物中被檢測到,但是植物提取物中未發現。

QQ截圖20181207161508.png

圖1.  赤芍(藍色)和白芍(紅色)植物提取物的HPLC譜圖

QQ截圖20181207161523.png

圖2.  赤芍配方顆粒(藍色)和赤芍植物提取物(紅色)的HPLC譜圖

材料與方法

采用 KNAUER AZURA HPLC plus四元梯度液相色譜系統,結合具有表面多孔填料的 KNAUER Eurospher II100-5 C18 P silica 色譜柱,建立了芍藥樣品的HPLC分析指紋圖譜方法。

 

儀器配置

配置

描述

AZURA P 6.1L

四元梯度泵,0.001~10ml/min,700bar,帶脫氣機

AZURA AS 6.1L

自動進樣器,700 bar,100 µl定量環

AZURA DAD 2.1L

二極管陣列檢測器,190~700   nm

流通池

分析型高壓流通池,光程10   mm, 體積10 µl

AZURA CT 2.1

柱溫箱,5 – 85 °C

色譜柱

Eurospher II 100-5 C18 P, 250   x 4.6 mm,5µm,帶預柱  

軟件

ClarityChrom 或 OpenLab

關于該方法和配置的更多詳情,請聯系綠綿科技 www.lumtech.com.cn

 

HPLC方法

色譜柱:Eurospher II 100-5 C18 P, 250 x 4.6 mm,5µm,帶預柱

流動相:A:Water + 0.05 % 磷酸;B:乙腈

梯度:0~60min,95% A + 5% B;

流速:1.0ml/min

柱溫:40℃

進樣體積:10µL

檢測波長:230nm。

結論

本方法給出了白芍和赤芍提取物的差異,赤芍配方顆粒和根提取物的差異也可以采用該方法進行區別。赤芍和赤芍配方顆粒均檢測到保留時間為26min的峰,而白芍未檢測到此峰,該峰可作為區別赤芍和白芍的特征峰。

赤芍配方顆粒和赤芍的HPLC指紋譜圖非常相似,只是芍藥苷濃度不同。赤芍配方顆粒含有赤芍沒有的三個特征峰,可能和它們原料的栽培相關。


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